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​生化作育箱敷衍大肠杆菌在检测中的运用

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​生化作育箱敷衍大肠杆菌在检测中的运用

公布日期:2019-03-27 作者: 点击:

生化作育箱敷衍大肠杆菌在检测中的运用

  大肠菌群测定的应用细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌紧张来于人畜粪便,故以此作为粪便污问鼎标来评价食品的卫生质量,推测食品中有否污染肠道致病菌的约莫。

  食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最约莫数(MPN)表现。

  1 配置和质料1.1 生化作育箱:恒定温度36±1℃。

  1.2 冰箱:0~4℃。

  1.3 利来国际下载水浴 :44.5±0.5℃。

  1.4 天平。

  1.5 显微镜。

  1.6 均质器或乳钵。

  1.7 平皿:直径为90mm。

  1.8 试管。

  1.9 吸管。

  1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。

  1.11 玻璃珠:直径约5mm。

  1.12 载玻片。

  1.13 酒精灯。

  1.14 试管架。

  2 作育基和试剂2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规矩。

  2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规矩。

  2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规矩。

  2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规矩。

  2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规矩。

  2.6 生理盐水。

  2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规矩。

  3 应用步伐3.1 检样稀释3.1.1 以无菌应用将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置妥当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经富裕振摇或研磨做成1:10的匀称稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速率处置处分1min,做成1:10的匀称稀释液。

  3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。

  3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条应用依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。

  3.1.4 依据食品卫生范例要求或对检样污染环境的估量,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。

  3.2 乳糖发酵实行将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,作育24±2h,如全部乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列步伐举行。

  3.3 疏散作育将产气的发酵管区分转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,作育18-24h,然后取出,观察菌落外形,并做革兰氏染色和证明实行。

  3.4 证明实行在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个举行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内作育24±2h,观察产气环境。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。

  3.5 报告依据证明为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。

  4 粪大肠菌群(faecal coliform)4.1 用接种环将全部产气的乳糖胆盐发酵管作育物(见3.2条)转种于EC肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),作育24±2h,经作育后,如全部EC肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将全部产气的EC肉汤管区分转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 作育18-24h,凡平板上有典范菌落者,则证明为粪大肠菌群阳性。

  4.2 结果报告依据证明为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。


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